關(guān)于滅菌驗(yàn)證的10個(gè)注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng) 1：選擇正確的滅菌周期

有三種基本類型的滅菌周期。根據(jù)待滅菌物質(zhì)的類型進(jìn)行選擇。

堅(jiān)硬裝載（真空）

適用于那些易于滅菌的物質(zhì)，因?yàn)榭諝馇宄驼羝┩笇?duì)這些物質(zhì)是高度有效的。例如：敞開的玻璃器皿和大口徑的管道。

典型的堅(jiān)硬物品滅菌循環(huán)在通入蒸汽達(dá)到設(shè)定滅菌溫度前需要達(dá)到一個(gè)真空度。

包裹物品（真空）

用于滅菌困難的物品，因?yàn)楹蛨?jiān)硬品比起來空氣清除和蒸汽穿透更難實(shí)現(xiàn)。

例如，有蓋子的空瓶（玻璃或塑料），潔凈服，長軟管/管子，抽氣過濾器，進(jìn)/出口小的便攜式容器。

一個(gè)典型的包裹品滅菌循環(huán)在滅菌前至少進(jìn)行 3 次抽真空。滅菌后通過真空將負(fù)載中的蒸汽抽走。

液體（非真空）

一般含有液體的物品不能有大的真空度，否則液體會(huì)溢出。針對(duì)液體來說高壓滅菌鍋循環(huán)是在沒有真空度的情況下加熱和冷卻。蒸汽進(jìn)入腔室頂部置換空氣，空氣推入腔室的底部并排出。

選擇正確滅菌驗(yàn)證循環(huán)的步驟：

注意事項(xiàng) 2：使用哪一種負(fù)載配置

需要考慮的一個(gè)因素是選擇固定裝載還是可變的裝載。在驗(yàn)證和操作靈活性之間需要一個(gè)權(quán)衡- 你是否驗(yàn)證最（zui）大最小裝載以增加生產(chǎn)的靈活性？下面是需要考慮的一些典型裝載模式：

固定裝載/固定位置模式 意味著, 任何待滅菌裝載將以完全相同的方式放置在室內(nèi)。在標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)流程（SOP）中應(yīng)有負(fù)載配置的圖表，因此操作者可以在腦海中再現(xiàn)每一個(gè)運(yùn)行過程的負(fù)載。這種情況要求最少的驗(yàn)證運(yùn)行（3），但負(fù)載配置沒有靈活性。

固定負(fù)載/可變位置模式 指負(fù)載在高壓滅菌器內(nèi)的位置是可變的。在 SOP 中只需一個(gè)負(fù)載列表。在測(cè)試運(yùn)行過程中，驗(yàn)證運(yùn)行應(yīng)通過輪換負(fù)荷物品逐個(gè)位置論證不同位置的等效性。如果經(jīng)過 3 個(gè)run的驗(yàn)證證明了位置的等效性那就可以停止。固定負(fù)載/可變位置的模式給操作者操作高壓滅菌器時(shí)帶來靈活性。針對(duì)包含不同物品的大負(fù)載來說，這樣可以節(jié)省時(shí)間。

可變負(fù)載配置指腔室內(nèi)物品種類和/或數(shù)量不固定。驗(yàn)證運(yùn)行時(shí)必須表明此循環(huán)周期可以滿足最（zui）大和最小兩個(gè)負(fù)載模式。最小負(fù)載測(cè)試高壓滅菌器腔室一個(gè)物品，必須證明其是最難滅菌的一個(gè)物品。

注意事項(xiàng) 3：選擇合適的液體循環(huán)監(jiān)控裝置

液體滅菌時(shí)所選的監(jiān)控決定了待滅菌的負(fù)載能否通過接收標(biāo)準(zhǔn)。

需要不止一個(gè)液體監(jiān)控裝置以證明不同類型的瓶子和液體能滿足滅菌要求。選擇液體循環(huán)監(jiān)控裝置時(shí)需考慮以下因素：

●瓶子的大小和填充量-瓶子越大其體積越大，就越難滅菌。

●玻璃的厚度，厚玻璃比薄玻璃難滅菌。

●液體的粘度 – 粘度越大傳熱越慢，就越難滅菌。

理想情況下，液體監(jiān)控裝置所在應(yīng)是最難滅菌的（最壞情況），放置在腔室內(nèi)最冷點(diǎn)（靠近前門或在排水口正上方）。

不要試圖使用與待滅菌裝載完全不通過的液體監(jiān)控裝置，如果液體控制需要很長時(shí)間來達(dá)到滅菌溫度，則負(fù)載其他位置中的蛋白質(zhì)可能會(huì)變性（在監(jiān)控裝置到達(dá)滅菌溫度的過程中，可能已經(jīng)超出所要求的溫度）。

不要對(duì)不同組分的負(fù)載嘗試控制，如果液體控制需要很長時(shí)間還達(dá)不到滅菌溫度，則負(fù)載介質(zhì)中的蛋白質(zhì)將會(huì)變性（這可能已經(jīng)超出了控制的時(shí)候達(dá)到殺菌所需的溫度）。

可以根據(jù)相似粘度，瓶子大小和填充量大小進(jìn)行分組，減少不同類型的液體和瓶子所需驗(yàn)證測(cè)試的次數(shù)。每個(gè)液體控制將有一個(gè)與之相關(guān)的最（zui）大和最小負(fù)載配置。

使用程序化的控制，以確保每個(gè)液體控制所使用的液體、瓶子體積、填充量，及其在腔室內(nèi)的位置，在驗(yàn)證期間和后續(xù)操作過程中保持一致。

注意事項(xiàng) 4：確定哪些裝載物品是最難滅菌的和哪些位置最能代表滅菌的最差情況

由于負(fù)載包含很多不同類型物品，需要檢測(cè)的位置似乎很多。在不影響物品滅菌能力或破壞物品（關(guān)注貴重物品）的情況下，將熱電偶和指示劑（BI 與 CI）放入物品中也是非常困難的。

我們必須逐個(gè)逐個(gè)評(píng)估每個(gè)物品，確定最（zui）佳挑戰(zhàn)方式。通常,物品必須以某種方式密封,以確保其蒸汽滲透狀態(tài)不變。

舉例：

問：一個(gè)直徑均一的軟管內(nèi)哪一點(diǎn)最難滅菌？

答：在軟管長度的中（zhong）心。

問：如何將一個(gè) 3 米長的熱電偶插入 20 米的軟管中間？

答：在軟管中間刻一插槽，熱電偶沿著插槽插入軟管，確保用硅膠將插槽密封，如果你沒有密封，則不能挑戰(zhàn)軟管。或者，將兩個(gè) 10 米的軟管（如有）插入熱電偶后用連接器將其連接，用這種方法則不用破壞 20 米長的管子。

問：瓶子、錐形瓶和柱形瓶那個(gè)位置最難滅菌？

答：在靠近底部的中間（但不接觸底面）。

問：如何保持熱電偶在一個(gè)密封瓶子里的位置？

答：選擇一個(gè)內(nèi)徑與熱電偶探頭相近的硅橡膠管件套住它以確保不會(huì)滑落。在瓶蓋上鉆一個(gè)和管子外徑一樣大的孔。通過孔將管子插入瓶中。將探頭推入管子中，推動(dòng)探頭直至到達(dá)瓶子中所需位置。確保它不會(huì)觸碰瓶壁。對(duì)于橡膠瓶塞的瓶子，在篩子中間鉆一個(gè)小孔，足以使熱電偶通過。

注意事項(xiàng) 5：有線熱電偶較復(fù)雜，且并非總是提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)

下面重（zhong）點(diǎn)介紹一些使用熱電偶傳感器時(shí)的注意事項(xiàng)：

●當(dāng)導(dǎo)線的外層塑料保護(hù)膜被切割并且有空氣或蒸汽通過，就會(huì)發(fā)生一些蒸汽損耗（泄漏），可能會(huì)導(dǎo)致泄漏測(cè)試失敗。

●在腔室內(nèi)的熱電偶會(huì)吸冷凝水，需要在腔室外部將熱電偶保護(hù)層切開以將冷凝水釋放。如冷凝水通過熱電偶流到驗(yàn)證儀電子元件，熱電偶將損壞。

●熱電偶可能難以在不影響物品滅菌和/或破壞物品 (貴重物品)的情況下，放入物品中。

●當(dāng)進(jìn)料或出料時(shí)熱電偶可能被高壓滅菌器的輪子卡住（并損壞）。

●將熱電偶裝在密封瓶里并且不碰到內(nèi)壁是很難做到的，并且降低瓶子的無菌程度。

●你可能會(huì)受限于高溫滅菌器進(jìn)口的導(dǎo)線數(shù)量。

即使前/后校準(zhǔn)確認(rèn)符合標(biāo)準(zhǔn)，某些位置熱電偶電阻也會(huì)發(fā)生變化，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確和/或不可靠。

示例：

此示例包含裝載腔室內(nèi)的9個(gè)熱電偶。他們均勻分布在頂部，中部和底部，以及前、中、后部。

該研究使用有線熱電偶用于測(cè)試 121.1℃ 40 分鐘的負(fù)載腔體 。內(nèi)室最（zui）大壓力 2.16bar（在任何時(shí)間）相當(dāng)于 122.7℃。一個(gè)探頭（頂部前左）溫度持續(xù)維持在123.3℃ - 123.5℃之間。所有其他探頭則在規(guī)定溫度范圍120.1℃ +2 ℃/-1℃內(nèi)，在122.4 ℃至 122.7℃之間。

溫度偏差開始于加熱階段，并在滅菌和真空冷卻階段仍然存在。該設(shè)備工程師和制造商一致認(rèn)為，在這個(gè)點(diǎn)的溫度讀數(shù)是不準(zhǔn)確和不可靠的。熱電偶讀數(shù)與蒸汽壓力讀數(shù)以及其他熱電偶讀數(shù)不一致。因此，在這一點(diǎn)沒有任何有用的數(shù)據(jù)。

注意事項(xiàng) 6：確定接受標(biāo)準(zhǔn)

一個(gè)例子：當(dāng)您運(yùn)行驗(yàn)證測(cè)試時(shí)，您只認(rèn)識(shí)到能不能達(dá)到接受標(biāo)準(zhǔn)。但是，是不是真的需要擺在首位？

重要的是要了解滅菌柜的周期及其參數(shù)。例如，是用于滅菌還是降低負(fù)荷？負(fù)載是熱敏感的嗎？還是可以承受過度滅菌？是多孔裝載（堅(jiān)硬/包裹的物品）嗎？還是液體？

大多數(shù)驗(yàn)證部門有標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）詳細(xì)說明滅菌工藝驗(yàn)證的要求。列出所有接受標(biāo)準(zhǔn)的完整清單。

滅菌柜不同階段的循環(huán)周期存在不同的遵循標(biāo)準(zhǔn)：

第（di）一階段 - 熱分布（空載）

第（di）二階段 - 熱分布（裝載）

第三階段 - 熱分布（裝載）內(nèi)部冷點(diǎn)測(cè)定

第四階段 - 熱穿透

對(duì)于滅菌液體（非真空）和多孔裝載（真空），第三階段和第四階段可能存在不同的要求，例如滅菌結(jié)束時(shí) F0>15（只針對(duì)液體）。

典型的接受標(biāo)準(zhǔn)如下：

●所有多孔裝載程序要求結(jié)束時(shí)SAL≤10-6。所有多孔物品至少進(jìn)行一次后真空循環(huán)以消除滅菌腔室內(nèi)的蒸汽（階段三和四）。

●所有液體循環(huán)周期要求SAL≤ 10-6，并且F0 > 15，因?yàn)樗鼈儾皇褂谜婵眨⒆匀焕鋮s（階段三和四）。

●在整個(gè)滅菌階段所有的溫度都在 3℃的變化范圍內(nèi)（階段二，三和四）例如，121.1℃-1℃/+2℃。

●在整個(gè)滅菌階段，滅菌柜各探頭溫度在平均溫度±1.0 ℃范圍內(nèi)，（階段二）。

●蒸汽的溫度與其蒸氣壓力相適應(yīng)（階段 II，III 及 IV）。

●時(shí)間計(jì)時(shí)控制在±1%的精度范圍內(nèi)（階段 II，III 及 IV）。

●驗(yàn)證前和驗(yàn)證后溫度測(cè)量系統(tǒng)的準(zhǔn)確度在±0.5℃的范圍內(nèi)。

●滅菌結(jié)束時(shí)裝載目測(cè)干燥（只針對(duì)多孔裝載）。

●所有生物指示劑培養(yǎng)結(jié)果陰性，陽性對(duì)照陽性（階段IV）。

注意事項(xiàng) 7：充分記錄驗(yàn)證測(cè)試

記錄驗(yàn)證測(cè)試期間進(jìn)行的工作,就是了解需要記錄的內(nèi)容以及如何記錄它。記錄清晰、一致和一目了然,并且必須符合所有 GMP 要求。它必須是完整的,并且必須包括以下項(xiàng)目:

●顯示高壓滅菌腔室內(nèi)所有裝載物品位置的圖表

●各熱電偶、BI、CI的數(shù)目和精確位置

●數(shù)據(jù)記錄器（熱電偶）打印輸出

●從滅菌器打印或輸出圖表

●滅菌周期起始和結(jié)束（根據(jù)數(shù)據(jù)記錄器的時(shí)間）

●高壓滅菌柜控制器和溫度驗(yàn)證儀的時(shí)間差

●各生物指示劑和化學(xué)指示劑的結(jié)果

●每個(gè)記錄分別標(biāo)明設(shè)備ID、負(fù)載說明、日期、測(cè)試編號(hào)和循環(huán)開始/結(jié)束時(shí)間

當(dāng)進(jìn)行驗(yàn)證測(cè)試過程中，如果你沒有良好記錄，在報(bào)告時(shí)，你將無法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。用不充分或不良的數(shù)據(jù)來支持驗(yàn)證過程將無法通過審計(jì)。

提示

注意謹(jǐn)慎使用熱電偶的精確度接受標(biāo)準(zhǔn)，如果標(biāo)準(zhǔn)過高（如所有的熱電偶必須達(dá)到接受標(biāo)準(zhǔn)），如有一或兩個(gè)熱電偶停止工作或在測(cè)試后超出溫度容許偏差，則可能會(huì)丟失大量運(yùn)行。

注意事項(xiàng) 8：熱電偶準(zhǔn)確度確認(rèn)的頻率

如果你正在進(jìn)行（如，在幾個(gè)星期內(nèi)）大量的驗(yàn)證測(cè)試，你需要考慮熱電偶的準(zhǔn)確度。可以在每次運(yùn)行和/或在整個(gè)測(cè)試周期結(jié)束后進(jìn)行。如果等到測(cè)試周期結(jié)束,則存在由于熱電偶未滿足接受驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)而導(dǎo)致所有測(cè)試失效的風(fēng)險(xiǎn)。但是，在每次測(cè)試后做檢查，則會(huì)大大增加完成測(cè)試所需的時(shí)間。每三次運(yùn)行或每隔幾天執(zhí)行一次準(zhǔn)確性檢查是一種合理的折衷方案。

正如注意事項(xiàng) 6 指出，驗(yàn)證熱電偶的準(zhǔn)確度，應(yīng)允許至少一個(gè)或兩個(gè)熱電偶失效。

注意事項(xiàng) 9：確保足夠的時(shí)間和支配來完成驗(yàn)證

人們很容易低估驗(yàn)證高溫滅菌器所需的時(shí)間，以及在整個(gè)驗(yàn)證過程中你需要做些什么。

例如，可能需要長達(dá)四個(gè)小時(shí)進(jìn)行準(zhǔn)備，例如，準(zhǔn)備裝載，放置探頭，將BI和 CI 放入負(fù)載中等。如果生產(chǎn)需要使用高壓滅菌器，你需要將探頭，BI 和 CI挪出來，然后從頭再來，白白浪費(fèi)一整天。在規(guī)劃驗(yàn)證項(xiàng)目時(shí)與生產(chǎn)部門合作，以確保你能有足夠的支配。

另一種方法是將階段II、階段III（熱分布）與階段IV（熱滲透）結(jié)合在一起，以節(jié)省時(shí)間。

這三個(gè)階段結(jié)合一起做可以減少完成驗(yàn)證的時(shí)間，不過，這樣做需要考慮以下幾點(diǎn)：

1、需要同時(shí)將探頭放入墻體內(nèi)和負(fù)載物上。通過高壓滅菌器驗(yàn)證口你能安裝所有的探頭嗎？如果不能，那么你需要單獨(dú)驗(yàn)證每個(gè)階段，或降低探頭的數(shù)量。

2、這三個(gè)階段結(jié)合在一起做會(huì)大大增加你的準(zhǔn)備時(shí)間。如果你的時(shí)間較緊(例如，在需要在特定時(shí)間撤離的建筑工地上),，你可能沒有時(shí)間完成這項(xiàng)分析。如果發(fā)生這種情況，那么它需要完成的時(shí)間比單獨(dú)做每個(gè)階段的時(shí)間要長。

3、如果你的時(shí)間很緊，將很容易遺忘一些東西或者犯錯(cuò)誤。

4、還有更多的數(shù)據(jù)需要考慮。進(jìn)行下一個(gè)研究前，如果你只檢查了幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，您可能會(huì)疏忽一些不符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容，這可能意味著所有后續(xù)的研究處于風(fēng)險(xiǎn)之中，因?yàn)閿?shù)據(jù)無法得到證實(shí)。例如，一個(gè)探頭讀數(shù)可能過高。

5、準(zhǔn)備充足的時(shí)間來完成報(bào)告。

如果你是對(duì)新的高壓滅菌器進(jìn)行驗(yàn)證，那么你需要足夠的時(shí)間進(jìn)行：

（一）編寫驗(yàn)證計(jì)劃

（二）編寫試機(jī)和 IQ方案

（三）準(zhǔn)備 OQ / PQ方案

（四）開展 OQ / PQ 的研究

（五）編寫 OQ / PQ 的報(bào)告，準(zhǔn)備文件等

如果你正在進(jìn)行（例如，在幾個(gè)星期內(nèi)）大量運(yùn)行測(cè)試，那么你需要確保有足夠的時(shí)間準(zhǔn)備文件和編寫報(bào)告。確保測(cè)試一整天，再用一整天來分析數(shù)據(jù)，也就是說，每項(xiàng)測(cè)試2天。同樣預(yù)留充足的時(shí)間編寫方案和報(bào)告，并進(jìn)行審核簽批（如適用）。如果你正在開發(fā)驗(yàn)證程序，那么這也將需要時(shí)間。

注意事項(xiàng) 10：制定正確的程序進(jìn)行控制，以確保持續(xù)一致和正確操作

恭喜你，你剛剛完成了一個(gè)包含不同周期和負(fù)載的新滅菌柜的驗(yàn)證。現(xiàn)在，需要那些控制，確保一致地使用經(jīng)驗(yàn)證的裝載？

●準(zhǔn)備新高溫滅菌器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。對(duì)每個(gè)驗(yàn)證程序必須有明確的指引，包括負(fù)載圖。應(yīng)準(zhǔn)備新高壓滅菌器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 (SOP)。它必須包括每個(gè)經(jīng)過驗(yàn)證的周期的明確準(zhǔn)則,包括負(fù)載配置圖。要求一個(gè)典型操作員按照SOP進(jìn)行操作來檢查SOP的清晰度。

●對(duì)每個(gè)使用高壓滅菌器操作者進(jìn)行培訓(xùn)和SOP 考試。

●每個(gè)程序都應(yīng)有記錄。

●采用基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法制定檢修指南，包含在 SOP 里。制造商的文件和網(wǎng)站可能有常見故障的詳述。

●對(duì)于高壓滅菌器和裝載來說，持續(xù)再確認(rèn)程序是必需的，頻率可為6，12或24個(gè)月。

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